O Nuzlocke Challenge é um conjunto de regras que visam criar um nível de dificuldade maior durante um jogo pokémon. Muitos jogadores acham que as regras também servem para estimular o uso de pokémons que o jogador normalmente não escolhe, promovendo laços mais estreitos com o pokémon do jogador. As regras não são uma função do jogo, mas são auto-impostas por parte do jogador, portanto, estão sujeitas a variações.

O nome do desafio se origina da série de quadrinhos do mesmo nome, que apresenta um Nuzleaf parecido com John Locke como um personagem recorrente da série.

As regras mais básicas do Nuzlocke Challenge, da forma em que apareceram pela primeira vez, são as seguintes:

• Qualquer pokémon que desmaiar (faint) deve ser considerado como morto e libertado (release);
• O jogador só poderá capturar o primeiro pokémon encontrado em cada área, e nenhum outro mais. Se o primeiro pokémon que encontrar for derrotado ou fugir, não poderá capturar o próximo que encontrar. Se o primeiro encontro na área é uma batalha em dupla que encontramos no matinho escuro, o jogador pode escolher qual dos dois pokémons gostaria de capturar;
• Embora não seja exatamente uma regra definitiva, os jogadores precisam dar apelidos para todos os pokémons que capturar, a ideia é que se possa criar “fortes laços emocionais”;
• Também não é uma regra definitiva, quando todos os pokémons que você tiver na equipe forem derrotados mortos, é considerado “game over”, ainda que tenha pokémons depositados no PC;
• É estipulado que o jogador use apenas pokémons conquistados por ele mesmo, o que significa que pokémons recebidos de troca, de eventos, etc., estão proibidos. Trocar e retrocar um mesmo pokémon (com o intuito de evolução, por exemplo), pode entrar nas exceções das regras. Receber um pokémon de alguém no jogo é válido;
• Também é proibido desligar e religar o jogo para voltar do ponto onde salvou quando alguma coisa sai errada, fazer algo assim tornaria todas as outras regras inúteis.

Embora as regras acima tendem a ser consistentes contra todos os adversários, muitas variações opcionais e alterações da regras existem para ajustar ainda mais a dificuldade. Eis a seguir algumas delas:

• O pokémon inicial é baseado no número ID do treinador. Se o número terminar de 1 a 3, o jogador começa com o tipo planta, terminando de 4 a 6, o inicial a ser escolhido é o tipo fogo, se terminar de 7 a 9, é o tipo água, terminando com 0 o jogador é livre para escolher;
• Você pode ajustar a primeira regra de encontro de pokémons para proibir a captura de pokémons duplicados;
• Não começar a obedecer as regras até que se tenha pokéballs para poder capturar pokémons. Por exemplo, não contar o Poochyena/Zigzagoon que você deve batalhar para salvar o professor Birtch como primeiro encontro da área, nem contar todos os encontros após esse até que se receba as pokéballs. Da mesma forma, nos jogos onde a batalha contra o rival é imediatamente após se receber o inicial, não aplicar a regra de libertar qualquer pokémon que desmaiar;
• Usar a mesma quantidade de pokémons que o adversário em batalhas de ginásio ou contra o rival;
• Abra o menu e vá na guia options, battle style e altere para “set”, isso fará com que em todas as batalhas você não seja perguntado se quer trocar de pokémon cada vez que derrotar um pokémon do adversário, fazendo com que ele já envie o pokémon diretamente;
• Após capturar o primeiro pokémon, seu inicial deve ser libertado (release);
• Banir o uso de Potions e outros itens de cura, recorrendo apenas ao Centro Pokémon para recuperar seus pokémons;
• Banir o uso do Centro Pokémon, recorrendo apenas a Potions e outros itens de cura para recuperar seus pokémons;
• Limitar o número de visitas ao Centro Pokémon a uma certa quantidade por cidade;
• Não dar nenhum item para seu pokémon segurar durante as batalhas;
• Limitar a quantidades de pokébolas que podem ser compradas por PokéMart;
• Nunca utilizar a Master Ball;
• Em vez de libertar o pokémon, ele pode ser deixado eternamente num box do PC ou transferido para outro jogo;
• Não evoluir os pokémons que capturar (pokémons já evoluídos podem ser capturados normalmente);
• Alterar a dificuldade do jogo com a key do Challenge Mode em Black2/White2;
• Não capturar pokémons lendários;
• Como regra de misericórdia, permitir ter de uma a três “segundas chances” ou reviver os pokémons desmaiados;
• Como outra regra de misericórdia, se encontrar um pokémonm shiny, devido a sua raridade, o jogador ainda poderá pegá-lo, mesmo se não for o primeiro encontro da área, além de também não precisar libertar os pokémons que por ventura desmaiarem nessa batalha;
• Mais uma regra de misericórdia, o jogador pode usar as insígnias de ginásio como ponto de verificação. Caso se atinja um “game over”, o jogador pode voltar do ponto onde obteve a insígnia do ginásio anterior;
• Se o jogador não tiver nenhum pokémon que possa usar um golpe de campo (como Cut ou Flash) que seja necessário para seguir com o jogo, é permitido pegar outro pokémon para ensinar esse golpe, porém ele não deverá ser usado em batalhas, e deverá ser libertado, transferido ou deixado no box permanentemente assim que o jogador consiga capturar um pokémons capaz de aprender o HM por meios legais;
• Permitir na Safari Zone encontrar um pokémon em cada área do Safari, ou continuar procurando até que se capture um pokémon de cada área;
• Não usar os PokéMarts;
• Nunca fugir de batalhas;
• Definir como limite de level o level do próximo líder de ginásio/campeão da elite 4, qualquer pokémon que passe desse level antes de enfrentar o líder/elite deve ser libertado

Entre diversas outras regras, os jogadores que aceitam esse tipo de desafio inventam suas próprias regras conforme sua preferência. Para se considerado como um verdadeiro Nuzlocke Challenge, ao menos as primeiras duas regras principais devem ser consideradas.